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Anlagerung der beiden Primer Wenn die DNA aufgeschmolzen ist, liegen zwei DNA-Einzelstränge mit komplementärer Basensequenz vor. In der jeweiligen 5' → 3'-Richtung gelesen, hat aber jeder Einzelstrang eine andere Basensequenz. Es werden daher zwei verschiedene DNA-Primer benötigt, für jeden Einzelstrang muss ein eigener Primer synthetisiert werden. Dazu muss natürlich die Basensequenz zumindest der beiden Primer-Regionen vorher bekannt sein, damit man die Primer gezielt synthetisieren kann. Die benötigten Primer werden chemisch hergestellt. Polymerase kettenreaktion arbeitsblatt in online. Dazu muss natürlich die Basensequenz am Anfang und am Ende der zu vervielfältigenden DNA bekannt sein. Von den Primern hängt es also ab, welcher DNA-Abschnitt überhaupt kopiert und vervielfältigt wird. 3. Polymerisierung Zwei DNA-Polymerasen synthetisieren, ausgehend von den Primern, bei 72°C die komplementären DNA-Stränge in der jeweiligen 5' → 3'-Richtung. Das heißt, an das 3'-OH-Ende des jeweiligen Primers wird das erste DNA-Nucleotid angehängt. Auf diese Weise werden aus der zu untersuchenden DNA zwei identische doppelsträngige DNA-Moleküle.
Synthese der Tochterstränge Für die PCR wird eine spezielle DNA-Polymerase verwendet. Eine normale Polymerase würde bereits bei einer Temperatur von 40 oder 50 ºC denaturieren, wäre also bei 72 ºC nicht zu gebrauchen. Aber es gibt ja bekanntlich Prokaryoten, die in heißen Schwefelquellen leben und locker Temperaturen von 90 oder sogar 100 ºC aushalten. Ein bekanntes Beispiel ist Thermus aquaticus. Polymerase-Kettenreaktion (PCR). Deren DNA-Polymerasen werden jetzt als Werkzeuge für die PCR eingesetzt. Man bezeichnet diese speziellen hitzeresistenten DNA-Polymerasen auch als Taq-Polymerasen, nach dem Bakterium T hermus aq uaticus. 4. Die weiteren Zyklen Jetzt ist der erste Zyklus der PCR beendet, ein DNA-Doppelstrang wurde identisch verdoppelt. Ein solcher PCR-Zyklus dauert ca. 5 Minuten. Schauen wir uns den nächsten Zyklus noch einmal kurz an: Der nächste Zyklus: Aufschmelzen der DNA, Anlagerung der Primer, DNA-Synthese (nicht mehr eingezeichnet) Autor: Ulrich Helmich 2021, Lizenz: siehe Seitenende Ich denke, dass wir an dieser Stelle aufhören können.
Nach 30 solcher Zyklen hat man bereits 1 Milliarde DNA-Kopien aus der ursprünglichen DNA gefertigt. Das reicht dann auch für die meisten Zwecke. Anwendungsgebiete der PCR Forensik Das bekannteste Anwendungsgebiet der PCR ist sicherlich die Erstellung eines genetischen Fingerabdrucks (genetic fingerprint). Dieses Verfahren wird in der Kriminalistik zur Erkennung von Tätern eingesetzt. Jeder Täter hinterlässt Spuren am Tatort, sei es in Form von verlorenen Haaren, Hautschuppen, Blut, Sperma oder Speichel. Ein einziges Haar genügt den Biologen und Gerichtsmedizinern, um ein genetisches Profil des Täters zu erstellen. Dazu wird die Täter-DNA zunächst vervielfacht, und zwar mithilfe der PCR. Von den in Frage kommenden Verdächtigen werden Speichelproben genommen und ebenfalls der PCR unterworfen. Die Täter-DNA und die Verdächtigen-DNA wird nun auf eine gelartige Folie gegeben und dann einer Gelelektrophorese unterzogen. Arbeitsblätter zur Unterrichtseinheit PCR — Landesbildungsserver Baden-Württemberg. Die Täter-DNA ergibt im UV-Licht ein typisches Bandenmuster, die DNA der Verdächtigen ebenfalls.
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