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Für die molekulare Untersuchung stehen verschiedene Methoden zur Verfügung, in unserem Institut wird eine Mikrosatelliten-Untersuchung mittels PCR durchgeführt. Dazu benötigen wir 3 ml EDTA-Blut des Patienten zum Vergleich mit dem normalen Status. Die Diagnose Oligodendrogliom wird durch den Nachweis des kombinierten Verlustes der Chromosomen 1p und 19q gestellt, Teilverluste sind diagnostisch nicht ausreichend und sprechen bei anderen Entitäten eher für eine schlechtere Prognose. Bei fehlendem Nachweis einer 1p/19q-Kodeletion kann der Verlust der Kernfärbung für ATRX in der Immunhistochemie als Kriterium für die Diagnose eines astrozytären Tumors gewertet werden. Strahlentherapie fällt 1x unvorhergesehen aus – Diagnose Glioblastom (4,8 Monate ohne OP Überlebenszeit). Auch p53-Mutationen sind dafür. Bei Gliomen in Mittellinien-naher Lokalisation, insbesondere Rückenmarks-, Pons- und Thalamusgliomen bei Jugendlichen und jüngeren Erwachsenen, die einen IDH-Wildtyp aufweisen, sollte eine Untersuchung der H3. 3-K27M-Mutation erfolgen (Immunhistochemisch, Sequenzierung). Schwierig gestalten sich noch die diffusen Astrozytome ohne Nachweis einer IDH-Mutation.
Dafür wird ein Bereich des MGMT -Gens mit Hilfe der methylspezifischen Polymerase-Kettenreaktion (MS-PCR) jeweils spezifisch für das methylierte (= inaktive) oder unmethylierte (= aktive) Gen vervielfältigt [1, 3]. Der Grad der Methylierung ergibt sich dabei durch unterschiedlich starke Signale beider Reaktionsansätze. Zur Validierung der Ergebnisse werden mehrere Kontrollen eingesetzt. Falls notwendig wird die PCR-Analyse durch eine Sequenzierung des zugehörigen Genabschnittes für eine Quantifizerung ergänzt (Pyrosequencing). Zum Nachweis einer (teilweisen) Methylierung, wird die DNA so behandelt, dass sich ihre Sequenz an den methylierten Stellen nicht verändert (Austausch einer Cytosin-Base (C) durch eine Thymin-Base (T)). Mgmt status nicht methyliert online. Falls vorhanden, spiegelt sich diese Veränderung in den Sequenzierungs-Ergebnissen wider. Beide Methoden liefern in Kombination ein sinnvolles molekulardiagnostisches Werkzeug zur Charakterisierung von Glioblastomen und erlauben eine Vorhersage über das Ansprechen des Tumors auf den Einsatz von alkylierenden Chemotherapeutika.
Indikation O6-Methylguanin-DNA-Methyltransferase (MGMT) ist ein DNA-Reparaturenzym, das Alkyladdukte aus der O6-Position von Guanin entfernt. Die epigenetische Stummschaltung des MGMT-Gens durch Promotormethylierung wurde mit einer verminderten Produktion des Enzyms in Verbindung gebracht, die diesen DNA-Reparaturmechanismus beeinträchtigen und das Ansprechen auf eine Alkylierungsmitteltherapie (wie Temozolomid) vorhersagen kann. Mgmt status nicht methyliert b. Darüber hinaus ist der Methylierungsstatus des MGMT-Genpromotors ein prognostischer Biomarker bei pädiatrischen und erwachsenen Patienten mit Glioblastom. Daher ist der Test auf MGMT-Genpromotormethylierung zu einem wichtigen Assay zur Identifizierung von Patienten geworden, die eine bessere Gesamtprognose haben und möglicherweise besser auf Alkylierungsmittel ansprechen. Methodik Bisulfitumwandlung von aus formalinfixiertem, in Paraffin eingebettetem Tumorgewebe gereinigter DNA, gefolgt von paralleler Amplifikation des methylierten MGMT-Genpromotors und eines Teils des Beta-Aktin, ACTB, -Gens als Beladungsreferenz unter Verwendung von methylierungsspezifischer Echtzeit-PCR (MS-PCR) Testparameter Dieser Assay bestimmt den Methylierungsstatus von acht CpG-Inseln innerhalb des MGMT-Genpromotors.
Insofern ist es hilfreich, wenn Sie Ihre aktuelle Größe und Ihr Gewicht beim Arztbesuch wissen. Zur Vermeidung von Übelkeit und Erbrechen wird jeweils schon prophylaktisch ein Medikament gegen Übelkeit eingesetzt. Das heißt, Sie nehmen normalerweise 30 Minuten vor der Chemotherapie ein zusätzliches Medikament gegen Übelkeit (wie z. B. Metoclopramid oder Ondansetron) ein. Universitätsklinikum des Saarlandes - 404. Sollte dies nicht ausreichend sein, dann kontaktieren Sie bitte Ihre behandelnde Ärztin bzw. Ihren behandelnden Arzt. Bei einigen Patientinnen und Patienten kann es notwendig sein, die Übelkeitsprophylaxe zu verstärken. Während der gesamten Therapie und bis mindestens vier Wochen nach Beendigung, sind regelmäßige Laborkontrollen notwendig. Es wird empfohlen, wöchentlich ein Blutbild und alle vier Wochen ein Differenzialblutbild, inklusive der Elektrolyte, Gerinnungsparameter sowie der Leber- und Nierenwerte zu erstellen. Alle Ergebnisse der Laborkontrollen sollten stets zur nächsten Wiedervorstellung bei Ihren Ärztinnen und Ärzten, die mit Ihnen die Chemotherapie durchführen, mitgebracht oder vorab regelmäßig gemailt bzw. gefaxt werden.
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